بررسی ایزوزیم های آلکالین فسفاتاز در سرم و بزاق زنان مبتلا به سقط های سه ماهه اول بارداری

آنزیم آلکالن فسفاتاز سرم انسانی از پروتئین های دایمر حاوی یون های فلزی mg و zn بوده وکه وزن مولکولی آن kd 130 در حالت گلیکوزیله می باشد. از حیث فارماکولوژی، داروهای زیادی بر عملکرد alp اثر و باعث افزایش سطح سرمی آن در بدن می شوند. به این علت مطالعه آنزیم ها به ویژه alp، در آزمایشگاه می تواند الگوی مناسبی برای طراحی داروهای جدید و مطالعه نحوه اثر آنها باشد. میزان آنزیم آلکالن فسفاتاز در سرم انسانی در دوره ی بارداری افزایش می یابد. در این مطالعه ما بررسی فعالیت آنزیمی را در دو گروه نمونه ی کنترل و مداخله گر انجام دادیم که قیاسی بین این دو گروه باشد تا احتمال تا?ثیر آنزیم آلکالن فسفاتاز به عنوان مارکری برای سنجش در افراد تهدید به سقط بررسی گردد. با انجام آزمایشات متعدد، در ژل زایموگرام باندهای ایزوآنزیم های آلکالن فسفاتاز را مشاهده کردیم. بعد از سنجش فعالیت آنزیم، با استفاده از رسوب آمونیوم سولفات و سپس ستون کروماتوگرافی تعویض یونی تخلیص انجام شد و باند الکتروفورز آنزیم آلکالن فسفاتاز در 67 کیلودالتون مشاهده گشت. این آنزیم در محدوده ی وسیعی از ph (ph های 6/10-7/5) فعال است و پایداری در ph های بحرانی و پارامترهای سینتیکی از جمله vmax و km آنزیم خالص شده و پارامتر k0.5 آنزیم آلوستریک قبل از تخلیص بر اساس نمودار هیل نیز تعیین شدند که فعالیت ویژه آنزیم تخلیص شده 5/2 برابر نمونه ی اصلی بوده است. در تمامی این پژوهش قیاس در میان هر دو گروه از نمونه ها بوده است. سپس پارامترهای ph بهینه و پایداری آنزیم اندازه گیری شد. نتایج نشان داد در میان نمونه های مورد نظر، فعالیت آنزیم و تعداد ایزوآنزیم های آلکالن فسفاتاز در نمونه های کنترل بیشتر از نمونه های مداخله گر بوده است و میزان پروتئین کل این دو گروه تفاوت معنی داری نداشت. سپس برای مشاهده ی ایزوآنزیم های آلکالن فسفاتاز روش ژل الکتروفورز انجام گشت که در نهایت چهار ایزوآنزیم مشاهده گشت.